Use of conjunctival swab for detection Canine Visceral Leishmaniasis by PCR

A leishmaniose visceral canina é uma zoonose, no Brasil causado pelo protozoário Leishmania chagasi (syn. L. infantum). É endêmica em 88 países, os quais compreendem regiões tropicais e subtropicais do Velho e do Novo Mundo, com incidência estimada em 2 milhões de casos por ano. No ambiente urbano, o cão doméstico é considerado o principal reservatório do parasito. A transmissão da doença ocorre através da picada do vetor, díptero flebotomíneo, da espécie Lutzomyia longipalpis. O diagnóstico pode ser feito através de métodos diretos, como esfregaço preparado com os diferentes órgãos linfoides, Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), cultivo in vitro do parasito, ou por métodos sorológicos, como ELISA (Ensaio Imunoenzimático) e RIFI (Reação de Imunofluorescência Indireta). O controle epidemiológico da doença humana envolve o tratamento sistemático dos casos humanos, borrifação de inseticida em região domiciliar e peridomiciliar e eliminação de cães soropositivos, ponto mais controverso do programa de controle. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a técnica não invasiva do suabe conjuntival na identificação por PCR de leishmaniose canina. As amostras, de sangue e suabe conjuntival, foram coletadas durante inquérito epidemiológico realizado na cidade de Ilha Solteira - SP. A prevalência de animais positivos em pelo menos um dos três testes (RIFI, PCR de sangue, e PCR de suabe conjuntival) foi de 28,17% (60/213). No teste sorológico RIFI, um total de 13,6% (29/213) dos cães reagiram positivamente. Na PCR do suabe conjuntival, 13,1% (28/213) dos cães foram positivos, e na PCR de sangue total também obtivemos 13,1% (28/213) positivos. Comparando os animais testados pela RIFI e pela PCR de suabe conjuntival, 7,9% (17/213) animais foram positivos em ambos os testes, enquanto 81,2% (173/213) animais foram negativos em ambos os testes (PCR-SC e RIFI). Dos animais testados para PCR-SC, 5,1% (11/213) foram positivos apenas neste teste. Na sorologia, 5,6% (12/213) reagiram positivamente apenas pela RIFI. A sensibilidade e especificidade da PCR-SC foram respectivamente 58,6% e 94,0%, valor preditivo positivo de 61,0%, valor preditivo negativo de 94,0%, e o índice kappa 0,53, o qual demonstra moderada concordância entre os testes. Ao se comparar a RIFI com a PCR-SG, dos animais testados, 3,3% (7/213) foram positivos nos dois testes simultaneamente, 13,6% (29/213) foram positivos apenas na RIFI, logo, 9,9% (21/213) foram positivos apenas na PCR-SG. Foram negativos nos dois testes 76,5% (163/231). A PCR-SG demonstrou sensibilidade de 24,1%, especificidade de 88,5%, valor preditivo positivo de 25,0% e valor preditivo negativo de 88,0% e índice kappa de 0,13, quando comparado à RIFI, indicando uma fraca concordância. Além disso, foram positivos em todos os três testes 2,35% (5/213), e apenas 0,47% (1/213) foi positivo nos testes de PCR-SG e PCR-SC. Os resultados demonstraram que o suabe conjuntival é uma boa alternativa, fácil e pouco invasiva, que pode ser utilizada para auxiliar inquéritos e estudos epidemiológicos da Leishmaniose Visceral Canina.Canine visceral leishmaniasis is a zoonosis in Brazil caused by the protozoan Leishmania chagasi (syn. L. infantum). It is endemic in 88 countries, which include tropical and subtropical regions of the Old and New World, with an estimated incidence of 2 million cases per year. In the urban environment, the domestic dog is the main reservoir of the parasite. Disease transmission occurs through the bite of the vector, sandfly, Lutzomyia longipalpis species. The diagnosis by direct methods can be made, such as smear prepared with different lymphoid organs, Polymerase Chain Reaction (PCR) in vitro culture of the parasite, or by serological methods such as ELISA (enzyme immunoassay) and IFAT (Indirect Immunofluorescence Test). The epidemiological control of human disease involves the systematic treatment of human cases, insecticide spraying in domiciliary area and elimination of seropositive dogs, most controversial point of the control program. The objective of this study was evaluate the noninvasive technique of conjunctival swab for canine leishmaniasis PCR identification. Were collected Samples of blood and conjunctival swab during an epidemiological survey conducted in the city of Ilha Solteira SP. The prevalence of positive animals in at least one of the three test (IFAT, blood PCR, and swab PCR) was 28.17% (60/213). In IFAT serological test, 13.6% (29/213) of the dogs responded positively. In conjunctival swabs PCR, 13.1% (28/213) dogs were positive, and PCR of whole blood obtained 13.1% (28/213) positive. Comparing the animals tested by IFAT and conjunctival swab PCR, 7.9% (17/213) were positive in both tests, while 81.2% (173/213) animals were negative in both tests. Of the tested animals for swab PCR, 5.1% (11/213) were positive only in this test. In serology, 5.6% (12/213) reacted positively only by IFAT. The sensitivity and specificity of swab PCR were respectively 58.6% and 94.0%, positive predictive value 61.0%, negative predictive value of 94.0%, and kappa 0.53, which demonstrates moderate agreement between tests. Comparing the IFAT with blood PCR, the animals tested, 3.3% (7/213) were positive in both tests simultaneously, 13.6% (29/213) were positive only by IFAT, so, 9, 86% (21/213) were positive only by blood PCR. Were negative in both tests 76.5% (163/213). The blood PCR demonstrated a sensitivity of 24.1%, specificity 88.5%, positive predictive value 25% and negative predictive value of 88% and coefficient of agreement (kappa) of 0.13, compared to IFAT, indicating poor agreement. Furthermore, were positive in all three tests 2.35% (5/213), and only 0.47% (1/213) were positive in the PCR-SC and PCR-SG test. The results showed that conjunctival swab is a good alternative, easier and less invasive that can be used to aid investigations and epidemiological studies of Canine Visceral Leishmaniasis