Regulação dos transportadores da glicose na retina normal e diabética : estudo da distribuição e expressão do GLUTI

Tese de doutoramento em Ciências Biomédicas apresentada à Fac. de Medicina de CoimbraO transporte de glicose é mediado pelo GLUT1 nas células endoteliais da retina. Este transportador permite a difusão facilitada de glicose, principal nutriente essencial ao metabolismo da retina. Alterações na distribuição ou expressão do GLUT1 podem ter um importante impacto no transporte de glicose. A parte inicial deste trabalho teve como objectivo avaliar qual o efeito da diabetes de longa duração na distribuição do GLUT1 da BHR interna. Para isso, foram estudadas as alterações de imuno-reactividade do GLUT1 das células endoteliais da retina de ratos Goto-Kakizaki, recorrendo-se à microscopia electrónica de transmissão. Da avaliação na distribuição do GLUT1 marcado com partículas de ouro verificou-se que não existe uma diminuição compensatória no GLUT1 ao nível da BHR interna, nos ratos GK com diabetes prolongada. Numa segunda fase do trabalho, avaliou-se o efeito da diabetes nas alterações de expressão do transportador GLUT1. A hiperglicémia crónica induziu um decréscimo significativo na quantidade de proteína GLUT1 sem no entanto se observarem alterações significativas nos níveis de RNAm do GLUT1. Estes resultados sugerem que a degradação do GLUT1 é estimulada na condição de diabetes. O GLUT1 imunoprecipitado a partir de retinas diabéticas reagiu com anticorpos contra a ubiquitina. Estes resultados mostram que a abundância do GLUT1 nas células endoteliais da retina diminui em resposta à hiperglicémia, e que o GLUT1 é ubiquitinilado. A ubiquitinilação do GLUT1 pode constituir o mecanismo que marca o GLUT1 para degradação na Diabetes Mellitus. Na última fase do trabalho foi dado especial ênfase ao papel do stress oxidativo como um mecanismo iniciador de algumas das lesões patofisiológicas associadas à Diabetes Mellitus. Assim, pretendeu-se investigar o efeito do stress oxidativo na regulação dos níveis de GLUT1 nas células endoteliais da retina e avaliar o envolvimento do proteossoma nessa regulação. A oxidação celular induzida por glucose oxidase conduz a um decréscimo, dependente da concentração, do GLUT1. A adição de inibidores do proteossoma resulta num aumento do conteúdo de GLUT1. Estes resultados sugerem o stress oxidativo como uma potencial via através da qual a hiperglicémia conduz a uma sobre-regulação de componentes da via UPP, com consequente aumento na degradação do GLUT1