[[alternative]]Cloning and characterization of the rice α-amylase gene promoters

[[abstract]]本實驗室巳發現在水稻懸浮培養細胞的培養基中施以缺糖處理, 則細胞中的某些α- amylase 基因會大量表現, α- amylase 也大量製造及分泌到細細胞外的培養基中。 本論文即嘗試自水稻的genomic DNA library 中篩選出受到缺糖誘導而大量表現的α - amylase 基因的啟動子及記號勝 鏈的DNA 序列, 進而利用α- lamylase基因的啟 動子及訊號勝 鏈的DNA 序列與GUS 報導基因(reporter gene) 及抗Hygromycin基因 共同構築成為一種GUS 表現載體, 並將這轉殖到水稻懸浮培養細胞中, 以瞭解在α- amylase 基因的動子控制下, GUS 表現載體在細胞內的表現情形。 本論文實驗已自水稻genomic DNA library中篩選得到12個不同的α- amylase genom ic DNA clones, 更進一步確定至少有4 個clones包含有α- amylase基因的5'端及訊 號勝踽鏈的DNA 序列, 這4 個clones 分別是RAMYG6,RAMYG8,RAMYG17及 RAMYG28。其 中 RAMYG6, RAMYG17及 RAMYG28是受缺糖誘導而大量表現的基因。因此將RAMYG6,RAM YG17及RAMYG28等三個clones的α- amylase基因的啟動子及訊號勝 鏈的DNA 序列與 GUS 基因及抗Hygromycin 基因接合在一起, 構築成一種GUS 表現載體, 結果獲得在R AMYG17的啟動子控制下的GUS 表現載體為pHE 132, pAE 132及pSE 132。在RAMYG28的 啟動子控制下的GUS 表現載體為RAMYG28-132(I)及RAMYG28-132(II)。在RAMYG6 的啟 動子控制下的GUS 表現載體為RAMYG6-132。 利用electroporation 的方法將pHE 132, pAE 132及RAMYG6-132分別轉殖到水稻懸浮 培養細胞中, 已經證明這三種GUS 表現載體在細胞內均能正常表現。基於以上實驗結 果, 可利用α- amylase 基因的啟動子及訊號勝 鏈引導蛋白質分泌的特性, 從事基 因調控與蛋白質分泌機制的研究。