Hz-1核多角體病毒潛伏感染特異基因起動子的探討

[[abstract]]HZ-1核多角體病毒屬於動物毒中的桿狀病毒科, 核多角體病毒屬中的C 亞屬, 是一種 感染鱗翅目昆蟲的常見病毒, 具有228.3Kb 雙股環狀的DNA 基因體。 分析Hz-1病毒潛伏感染時的基因表現, 發現只有某個基因持續地轉錄出RNA , 其他基 因都被 "關掉" 了, 顯然, 這個基因與潛伏感染的建立或維持有相當密切的關係, 我 們稱之為Persistency-Associate-Gene-l:PAG1 , 而由之轉錄出的RNA 則為Persiste ncy-Associated-Transcript-1: PAT1。 PAT1亦出現在急性感染情況中, 且在感染兩小時即出現, 似乎PAG1是屬於最早表現的 immediateearly genes(IE genes), 但是, PAG1與其他IE genes的表現模式又完全不 同, 而且PAG1可能不轉譯蛋白質, 而以RNA 的型式來行使其特殊功能( 潛伏感染與抗 病毒) ; 基於多種原因我們推測: PAG1屬於一種截然不同的IE genes, 是由不同的轉 錄機制所控制, 本實驗即欲從其起動子著手, 來探討PAG1的轉錄情形。 先運用基因選殖技術, 將預測的PAG1起動子取下, 接上易偵測表現情況的報告基因: ChloramphenicolAcetyl Transferase:構築成質體pPP-CAT , 再送進其寄主細胞內, 直接作CAT assay來反應起動子的功能; 實驗結果, pPP-CAT在三種Hz-1寄主細胞的正 常細胞株中並不表現; 考慮到PAG1起動子是否需要額外的因子以cis-actingor trans -acting 的方式提供協助, 於是嘗試將pPP-CAT 送進潛伏感染細胞株, 或經PAG1轉形 的細胞株中, 或在正常細胞的急性感染狀況中, 但都偵測不到CAT 活性; 然而pPP-CA T 卻在果蠅細胞株中具有相當高的表現量; 另外構築的一些涵蓋範圍不同的質體也無 法在Hz-1寄主細胞株內表現出CAT 活性, 但在果蠅細胞株(SL-2)內卻各有不同的表現 量。 為再一步證實起動子區域的正確性, 便用先導物延長法來尋找轉錄起點, 而找出的轉 錄起點, 雖與前人所作RNase protection的結果不甚吻合, 但由之推測的起動子範圍 卻相去不遠。 再利用含有PAG1 codingregion的質體: pHzE-M 為材料, 在轉錄起點前作不同程度的 刪剪, 形成三個deletionclones導入正常細胞內, 均與pHzE-M一樣, 會轉錄出PAT1, 且四者產生PAT1的量沒有顯著差異。 由於一直無法在Hz-1病毒寄主細胞中偵測到CAT 活性, 但卻能在保留轉錄起點上游60 0 bases 時偵測到PAT1, 於是我們懷疑: 是不是PAG1本身即存在著一個轉譯控制區, 不管這個控制區是在PAG1的5'end , 或構造基因區, 或是3'end , 這個可能性都因PA G1的蛋白質產物未被發現而大大地升高, 但仍需要更進一步的實驗來證實。