Caracterización morfológica, patogénica y genética del agente causal de la antracnosis (Colletotrichum gloeosporioides) en guanábana (Annona muricata) en el Valle del Cauca

La Antracnosis, causada por el hongo Colletotrichum gloeosporioides, ocasiona pérdidas hasta del 90% en huertos no tecnificados de guanábana. Para el control de la enfermedad se requiere conocer bien la sintomatología y las características del agente causal. Teniendo en cuenta que existe poca información al respecto, en este estudio se pretendió identificar y caracterizar morfológica, genética y patogénicamente los aislamientos de Colletotrichum spp. obtenidos de cultivos de guanábana en el Valle del Cauca (Colombia). De 109 aislamientos se caracterizaron 54, seleccionados al azar. La caracterización se basó en morfología de colonia, patogenicidad y reacción en cadena de la polimerasa (RCP) usando cebadores específicos ITS. CaInt2 (C. acutatum) y CgInt (C. gloeosporioides). Además se realizó corte con enzimas de restricción de la región ITS y se evaluó la diversidad genética de la población mediante Amplificación al Azar de Microsatélites (RAMs). Los resultados mostraron correlación de -0,84 entre características de crecimiento de los aislamientos con su patogenicidad, destacándose como muy patogénicos los de crecimiento lento que presentaron micelio gris, esporulación escasa y relieve ondulado. La amplificación con los cebadores específicos para C. gloeosporioides y C. acutatum, generó fragmentos de 450 pb y 490 pb respectivamente, corroborando la presencia de dos especies. Por otra parte la combinación de cebadores universales ITS1 e ITS4 generó un fragmento de 580 pb, que al digerirlo con las enzimas de restricción Hae III y RsaI, mostró diferencias en los patrones de restricción, dando lugar a dos grupos, correspondientes a las dos especies de Colletotrichum spp. El análisis de RAMs, mostró una gran variabilidad genética de los aislamientos y permitió concluir que hay correlación entre variabilidad patogénica - diámetro de colonia, con variabilidad genética. Estos resultados evidencian la diversidad fenotipica y genética de Colletotrichum spp. asociado a la antracnosis en guanábana. = Anthracnose, caused by the fungus Colletotrichum gloeosporioides, generates losses of up to 90% in traditionally grown soursop orchards. The pathogen attacks the leaves, branches, flowers, and fruits, producing black fruit rot, especially during the rainy season. Typical disease symptoms initially observed includes small dark specks in the tissue, followed by the formation of slightly sunken spots surrounded by a dark halo. Of 109 isolates of Colletotrichum spp. obtained from diseased crops in several production areas of Valle del Cauca, 54 were selected at random and characterized based on colony morphology, pathogenicity and polymerase chain reaction (PCR), using the specific primers ITS Ca Int2 (C. acutatum) and CgInt (C. gloeosporioides). In addition restriction enzyme digestion was performed on DNA from the internally transcribed spacer region of the ribosomal RNA gene for each strain and the genetic diversity of this population was evaluated by random amplified microsatellites (RAMs). The results showed a correlation of -0.84 between growth characteristics of isolates and pathogenicity. Slow growing isolates presenting gray mycelium, limited sporulation, and undulating relief were found to be highly pathogenic. The amplification with specific primers for C. gloeosporioides and C. acutatum generated 450-bp and 490-bp fragments, respectively, confirming the species identity. Fifty isolates were identified as C. gloeosporioides and 4 as C. acutatum. The combination of universal primers ITS1 and ITS4 generated a 580-bp fragment, which was digested by the Hae III and Rsa I restriction enzymes. The differences in restriction patterns gave rise to two groups that corresponded to each of the pathogen species. The analysis of RAMs indicated high genetic variability among isolates and made it possible to detect a relationship among pathogenic variability - colony diameter with genetic variability. These results illustrate the phenotypic and genetic diversity of Colletotrichum spp. associated with anthracnose of soursop