Purificació, caracterització i clonatge de la ribonucleasa de pàncreas humà

The answer to whether or not, human pancreatic ribonuclease may have a diagnostic value as a serum marker of pancreatic disease, depend upon the specific detection of ribonucleases originated in pancreas amogn those coexisting in serum. From our point of view, two approaches would be necessary. On one hand the characterization of the carbohydrate component of the human pancreatic ribonuclease because glycosylation is organ-specific. On the other hand, obtain monoclonal antibodies in order to specifically recognize the secretory -typeribonuclease in serum. The purification system that has been established consists of two chromatographic steps using HPLC. The first, an exchange cromatography, allows for a partial purification of ribonuclease component. The second, a reversed-phase chromatography, resolves chromatographically the human pancreatic ribonuclease heterogeneity into different fractionsLa resposta a si la ribonucleasa de pàncreas humà pot tenir algun valor diagnòstic com a marcador sèric de disfuncions pancreàtiques passa per la identificació de forma inequívoca de la ribonucleasa de pàncreas humà en sèrum. Segons el nostre enfoc, caldrien dues aproximacions, d’una banda la caracterització a nivell glucídic de la ribonucleasa de pàncreas humà, i de l’altra, el desenvolupament d’anticossos monoclonals dirigits a discriminar la ribonucleasa de tipus secretori d’entre els diferents tipus que coexisteixen en sèrum. En aquest sentit s’ha establert un sistema de purificació de la ribonucleasa pancreàtica humana que fos ràpid i repetitiu que respectés l’heterogeneïtat glucídica per a la seva posterior caracterització. El sistema de purificació establert a partir de pàncrees obtinguts a partir de donants sans d’òrgans consta de dues etapes cromatogràfiques per HPLC. La primera, una cromatografia de bescanvi catiònic, possibilita una purificació parcial, mentre la cromatografia de la fase inversa permet resoldre cromatogràficament l’heterogeneïtat de la ribonucleasa humana de pàncreas en diferents fraccion