Caracterización de candida parapsilosis complex en el área hospitalaria del H.U. Virgen del Rocío en el periodo 2003-2009

En los últimos años se ha observado un aumento en la incidencia de las infecciones invasoras por Candida spp, además de cambios temporales en las especies aisladas. También se ha registrado un aumento en la incidencia de enfermedad invasora por C. parapsilosis complex, ya que hay estudios que muestran que es la segunda especie de Candida más aislada en hemocultivos. Además la incidencia de Candidi asis invasora por C. parapsilosis complex varía geográficamente y en función de las características y enfermedades de base del paciente.El primero de los objetivos generales de este trabajo es analizar los datos procedentes de las candidemias producidas en el Hospital Universitario Virgen del Rocío en el período 2003-2009.Con respecto a las especies integrantes del complejo “psilosis”, C. parapsilosis, C. orthopsilosis y C. metapsilosis, hasta el momento en la literatura hay muy pocos datos acerca de su distribución así como de su sensibilidad a los agentes antifúngicos, dicho esto, nuestro segundo objetivo es conocer la distribución, mediante técnicas de biología molecular, de las distintas especies dentro del complejo en una colección de aislamientos de C. parapsilosis complex procedentes de diferentes localizaciones. La formación de biopelículas es el factor de virulencia más importante en C. parapsilosis complex, ya que estas confieren una elevada resistencia a las defensas del hospedador y a los agentes antifúngicos, por ello el tercer objetivo de este trabajo es la determinación mediante un ensayo in vitro de la capacidad de formación de biopeliculas de los diferentes aislamientos de C. parapsilosis complex. Por último y como consecuencia de lo anteriormente expuesto, el cuarto objetivo es estudiar la sensibilidad a los antifúngicos de estas levaduras tanto en forma planctónica como sésil.Los objetivos concretos de este trabajo son:1. Análisis de las candidemias identificadas en HU virgen del Rocío en el período 2003-2009.- Recoger y analizar los datos correspondientes a las candidemias registradas, teniendo en cuenta la especie de Candida productora así como el porcentaje atribuido a cada especie.- Análisis de los datos correspondientes a candidemias producidas por C. parapsilosis complex en relación al tipo de paciente.2. Identificación de levaduras en el laboratorio.- Identificación fenotípica de C. parapsilosis complex.- Identificación genotípica.- Puesta a punto de RAPD-PCR (Amplificación al azar de ADN polimórfico): Selección de cebadores.- Identificación a nivel de especie dentro del complejo “psilosis” mediante dos técnicas de biología molecular, RAPD- PCR y RFLP, y comparación de resultados entre estas.3. Determinación de la capacidad de formación de biopelículas.- Análisis de la relación entre especie y capacidad de formación de biopelículas.- Análisis de la relación entre procedencia de aislamiento y capacidad de formación de biopelículas.4. Estudiar la sensibilidad a los siguientes agentes antifúngicos, anfotericina B, anidulafungina y voriconazol.- Sobre las formas planctónicas de las tres especies.- Sobre las formas sésiles (biopelículas) de las tres especies