Nukleär kodierte Plastidenproteine bei der Grünalge \(\textit {Chlamydomonas reinhardtii}\)

Im Rahmen dieser Arbeit wurde die \(\it trans\)-Spleißmutante TR72 der einzelligen Grünalge \(\textit {Chlamydomonas reinhardtii}\) charakterisiert. Ausgehend von einem Cosmid-Klon wurde durch Subklonierungen zwei benachbarte Gene, \(\it Rat1\) und \(\it Rat2\), identifiziert, welche zusammen den Mutanten-Phänotyp komplementieren. Die Expression des \(\it Rat1\)-Gens wurde mit Hilfe von Primer-Extension-Analysen und RT-PCR untersucht. Ausgehend von der cDNA-Sequenz des \(\it Rat1\)-Gens wurden in der abgeleiteten Aminosäuresequenz des Polypeptids Homologien zu einer NAD\(^{+}\)-Bindedomäne nachgewiesen. Eine funktionelle Charakterisierung dieser Domäne wurde mittels ortsgerichteter Mutagenesen durchgeführt. Durch Epitop-Tagging und Western-Analysen konnte die plastidäre Lokalisation des \(\it Rat1\)-Polypeptides nachgewiesen werden. Ektopische Effekte der Mutation in TR72 auf die Genexpression des Zellkerns wurden mit Hilfe der DNA-Macroarray-Technik untersucht