Caracterização molecular, susceptibilidade a antibióticos e pesquisa de factores de virulência em Listeria spp. de alimentos e superfícies

Tese de mestrado. Biologia (Microbiologia Aplicada). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012Listeriosis is a great concern for public health due to its high fatality rates and L. monocytogenes, the species from the Listeria genus most commonly associated with this disease, is known to be disseminated through the food chain. The present study began by gathering Listeria spp. from three distinct environments: a cheese making factory, a slaughterhouse and a supermarket. After sampling the cheese making factory seven Listeria spp. were obtained (two L. monocytogenes from serogroup 1/2a-3a), 15 Listeria spp. were isolated at the slaughterhouse (six L. monocytogenes: four from serogroup 1/2a-3a and two from serogroup 4b-4e-4ab) and 30 Listeria spp. at the supermarket (12 L. monocytogenes: nine from serogroup 1/2a-3a, two from serogroup 1/2c-3c and one from serogroup 4b-4e-4ab). Overall, all sampling sites harbored L. monocytogenes belonging to the most virulent lineages (I and II), pointing to a health risk associated with the environments under study. To further assess the putative pathogenicity of the 52 Listeria, 13 clinical isolates (from Brazil, Denmark and Portugal) and 17 food isolates (from Spain and Portugal) were included in the present investigation for comparison purposes and all Listeria were analyzed regarding their antimicrobial susceptibility (to 11 antibiotics) and presence/expression of virulence factors (eg. hlyA, plcA, inlA, inlC, hemolysin, DNase). The results showed the increase of resistance to two clinically relevant antibiotics for the treatment of listeriosis (ampicillin and penicillin) and revealed the existence of multirresistant isolates, findings which represent a high risk for human health. Regarding the virulence profiles observed, they varied from the detection of one virulence trait to the presence of all factors tested, suggesting different levels of virulence among the isolates being investigated. Compilation of all the results obtained disclosed the occurrence of listeria isolates with high pathogenicity potential at all sampling sites, reinforcing the need for surveillance designed for detecting the presence of Listeria spp. in food products and food processing environments.A listeriose humana é uma doença associada a elevadas taxas de mortalidade, possuindo assim um elevado impacto para a saúde pública. De todas as espécies pertencentes ao género Listeria, a mais comumente responsável por esta doença é L. monocytogenes, que se encontra altamente disseminada pela cadeia alimentar. O presente estudo iniciou-se com a criação de uma coleção de isolados de Listeria recolhidos em três locais de amostragem (fábrica de queijos, matadouro de suínos e hipermercado). Assim, foram identificadas: sete Listeria spp. na fábrica de queijos (duas pertencentes à espécie L. monocytogenes serogrupo 1/2a-3a); 15 Listeria spp. no matadouro (seis pertencentes à espécie L. monocytogenes, quatro do serogrupo 1/2a-3a e duas do serogrupo 4b-4e-4ab); e 30 Listeria spp. no hipermercado (12 pertencentes à espécie L. monocytogenes, nove do serogrupo 1/2a-3a, duas do serogrupo 1/2c-3c e uma do serogrupo 4b-4e-4ab). Portanto, em todos os locais amostrados foram detectados serogrupos de L. monocytogenes pertencentes às linhagens mais preocupantes (I e II), o que per se já demonstra um certo risco para a saúde pública. Na tentativa de melhor averiguar o potencial de patogenicidade dos 52 isolados adicionaram-se à coleção 13 isolados clínicos (provenientes do Brasil, Dinamarca e Portugal) e ainda 17 isolados alimentares (isolados de peixe e queijo em Espanha e Portugal). Procedeu-se à análise da susceptibilidade a 11 antibióticos, bem como a avaliação da presença/expressão de factores de virulência (ex. hlyA, plcA, inlA, inlC, hemolisina, DNase). Dos resultados obtidos é importante destacar a emergência de resistência a dois dos antibióticos habitualmente utilizados no tratamento da listeriose (ampicilina e penicilina) e a existência de isolados multirresistentes, o que representa um elevado risco para a saúde pública. Relativamente aos perfis de virulência observados, estes vão desde a deteção de pelo menos um factor de virulência à presença de todos os factores testados, o que sugere diferentes graus de risco entre os isolados em estudo. A integração de todos os resultados obtidos permitiu avaliar que existem isolados com elevado potencial patogénico nos três locais amostrados, reforçando a necessidade de proceder à vigilância da presença de Listeria spp. em alimentos e ambientes em que os mesmos são processados e/ou comercializados