Deteção, transmissão e diversidade genotípica de Giardia duodenalis

Tese de doutoramento, Biologia (Microbiologia), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012Giardia duodenalis e um microrganismo eucariota unicelular flagelado, sendo um dos protozoários parasitas mais comuns no intestino do homem e o agente etiológico da giardiose. Em Portugal e reduzido o número de trabalhos publicados sobre este parasita pelo que, os objetivos deste estudo foram avaliar a frequência de infeção e fatores de risco associados, principais vias de transmissão e caracterização genotípica dos diferentes isolados encontrados. Foram estudadas 844 crianças selecionadas aleatoriamente em 25 centros de saúde, utentes do programa nacional de vacinação, do distrito de Lisboa. Foi recolhida uma amostra de fezes e um questionário de cada criança. A frequência de infeção por Giardia foi diagnosticada por exame direto e pelo método ELISA. Para estudo das fontes de infeção recolheram-se 74 amostras de àgua, processadas pelo Método USEPA 1623 para detetar Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os indicadores fecais e os parâmetros físico-químicos foram analisados de acordo com a Diretiva (2006/7/EC). Foram igualmente recolhidos 13 líquidos duodenais, 304 biopsias e 217 fezes de indivíduos sintomáticos. Na caracterização genotípica foram amplificados os genes gdh, bg, tpi e o gene de rRNA 18S. A frequência de infeção nas crianças assintomáticas foi 6,9%. As variáveis analisadas que constituíram fator de risco associado a infeção foram o nível de escolaridade dos pais, coinfecção com H. pylori, ausência de sistema de saneamento básico e contato com animal de estimação. Os resultados obtidos nas amostras ambientais apontam para uma ampla distribuição do protozoário nas praias fluviais portuguesas embora o risco para a saúde pública seja baixo. Foi encontrada uma alta frequência do genótipo A comparativamente ao B, tal como acontece nos restantes países do sul da Europa, e confirmada a existência de transmissão antroponótica em crianças e adultos em Portugal. Foi detetado, pela primeira vez, um surto de giardiose em Portugal continental.Giardia duodenalis is a flagellated unicellular eukaryotic organism, one of the most common protozoan parasites in diarrhoeal disease giardiasis. Since the number of published studies on this parasite is low in Portugal, the aims of this study are to estimate the frequency of infection and associated risk factors, establish transmission routes and genotype obtained isolates. 844 children living in the district of Lisbon were randomly selected from 25 health centers, while attending the national vaccination program. A stool sample and a questionnaire were collected for each child. The infection frequency was diagnosed by direct examination and by ELISA. 74 samples of water were also obtained and processed with 1623 USEPA method for detecting Giardia and Cryptosporidium. Faecal indicators and physicochemical parameters were analyzed according to the Directive (2006/7/EC). In this study, 13 duodenal fluid, 304 biopsies and 217 faeces from symptomatic patients were also collected. Multilocus sequencebased genotyping isolates was performed using genes gdh, bg, tpi and also the 18S rRNA gene. The frequency of infection found in asymptomatic children was 6.9%. Population-variables shown to be associated risk factors for G. duodenalis infection were education level of parents, co-infection with H. pylori, living in houses with own drainage system and reported household pet contact. Results obtained with environmental samples indicate a wide distribution of this protozon in Portuguese river beaches although the risk to public health is low. A high frequency of genotype A compared to B was found similary to other European countries. The existence of human transmission in Portugal was confirmed for children and adults. An outbreak of giardiasis was also detected for the first time in mainland Portugal