Activação transcricional em mutantes GIM de Saccharomyces cerevisiae

Tese de mestrado, Biologia (Microbiologia Aplicada), 2009, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasEm Saccharomyces cerevisiae existem 6 genes GIM que codificam as subunidades do complexo GimC, um complexo citoplasmático que participa na biogénese dos componentes do citosqueleto, a actina e a tubulina. Em levedura estes genes não são essenciais. Diversos dados na literatura sugerem que a actina e as subunidades Gim2, Gim5 e Gim1 podem assumir um papel na regulação da transcrição. Juntamente com a observação de que os mutantes gim exibem fenótipos distintos e padrões de expressão genética distintos em condições de stress, estes dados fazem com que seja de toda a pertinência o estudo de potenciais relações entre as várias proteínas Gim e activadores da transcrição de genes de resposta ao stress. Yap1 e Gcn4 são activadores transcricionais que regulam a resposta celular ao stress oxidativo e nutricional, respectivamente. Perceber se a actividade de ambos os activadores é afectada em mutantes gim, e se este efeito se deve a possíveis relações com subunidades Gim, pode justificar a observação de fenótipos distintos entre mutantes gim quando sujeitos a diferentes stresses e contribuir para a identificação de novas funções as subunidades Gim. Os resultados obtidos sugerem que a activação da transcrição apresenta diferenças entre mutantes gim e estirpe selvagem e apoiam a ideia de diferentes importâncias de cada subunidade Gim na célula. A subunidade Gim2 parece exercer um efeito negativo na activação da transcrição por Yap1 e Gcn4, ao contrário da subunidade Gim1 que parece desempenhar um papel na indução da actividade do Gcn4. Adicionalmente, todos os mutantes gim, à excepção do mutante _gim1, exibem um fenótipo de resistência ao 3-aminotriazol que não se verifica para a estirpe selvagem.In Saccharomyces cerevisiae exist 6 GIM genes that encode the Gim subunits of the GimC complex, a cytoplasmatic complex that participates in the biogenesis of the cytoskeleton components, actin and tubulin. In yeast, these genes are not essential. Several data in the literature suggest that actin and Gim2, Gim5 and Gim1 subunits can assume a role in transcription regulation. Together with the observation that gim mutants exhibit distinct phenotypes and distinct patterns of gene expression in stress conditions, these data makes the study of potential relations between the several Gim proteins and transcription activators of genes involved in stress response extremely significant. Yap1 and Gcn4 are transcription activators that play central roles in the responses they regulate, respectively, in oxidative and nutritional stresses. Understanding if the activity of both activators is affected in gim mutants, and if this effect is due to possible relations with Gim subunits, can justify the distinct phenotypes among gim mutants when subject to different stresses and contribute to the identification of new functions for the Gim subunits. Results obtained suggest that transcription activation is different between gim mutants and wild type strain and backs up the idea of different importances for each Gim subunit in the cell. Gim2 subunit appears to have a negative effect on Yap1 and Gcn4, as opposing to Gim1 subunit that seems to assume a role in Gcn4 activity. Additionally, all gim mutants, except _gim1 mutant, exhibit a 3-aminotriazole resistence phenotype that is not observed for the wild type strain