Les étapes précoces de la biogenèse du ribosome chez Saccharomyces cerevisiae

Les ribosomes sont des assemblages ribonucléoprotéiques responsables de la traduction des ARNm en protéines. Plus de 200 facteurs nucléiques et protéiques sont requis pour la production et l'assemblage des sous-unités matures du ribosome eucaryote. La biogenèse des ribosomes est un processus complexe comprenant de nombreuses étapes, coordonnées dans le temps et l'espace. Elle débute par la transcription de l'ADNr par l'ARN Pol. I au sein du nucléole. De nombreux facteurs de maturation vont s'assembler sur le transcrit naissant pour former la particule pré-ribosomique précoce. La formation correcte de cette particule est requise pour les clivages co-transcriptionnels aux sites A0, A1 et A2 qui permet la formation des précurseurs de la petit (pré-40S) et de la grande (pré-60S) sous-unité du ribosome. Au cours de ma thèse, je me suis attachée à caractériser précisément le rôle de deux protéines nucléolaires, Nop19p (YGR251W) et Efg1p (YGR271C-A), dans la biogenèse du ribosome. J'ai montré que ces facteurs s'associent physiquement aux particules pré-ribosomiques précoces. Leur absence entraîne l'accumulation d'un précurseur aberrant, le pré-ARNr de 23S, qui résulte d'un clivage direct au site A3. Cela induit un défaut de production de la petite sous-unité du ribosome et aboutit à la mort de la cellule. Nop19p, protéine essentielle, est requise lors des clivages précoces aux sites A0, A1 et A2 du pré-ARNr. Nos résultats montrent qu'elle est nécessaire à l'assemblage de Utp25p au sein du SSU Processome et au désassemblage de l'hélicase à ARN Dhr2p après les étapes précoces de maturation. L'observation du profil de sédimentation des particules ribosomiques en absence de Efg1p montre l'apparition d'une particule de 50S qui a précédemment été décrite comme un intermédiaire potentiel de la petite sous-unité du ribosome. L'apparition de cette particule spécifique, en absence de Efg1p, est concordante avec l'accumulation du pré-ARNr de 23S dont le devenir est toujours discuté. Cette particule de 50S pourrait donc être soit un intermédiaire spécifique de la petite sous-unité du ribosome soit un SSU Processome mal assemblé sujet à dégradation.Ribosomes are ribonucleoparticles responsible for mRNA translation into protein. In eukaryotes, more than 200 nucleic and proteic factors are required for production and assembly of mature ribosomal subunits. Ribosome biogenesis is a highly complex process including numerous steps, coordinated in time and space. It begins with the rDNA transcription by RNA Pol. I in the nucleolus. Many maturation factors will fit together on the nascent transcript to form the SSU Processome, a pre-ribosomal particle. The proper production of this particle is required for A0, A1 and A2 co-transcriptional cleavages, which lead to the production of small (pre-40S) and large subunit precursors (pre-60S). During my PhD, I have focused to characterize the precise role of two nucleolar proteins, Nop19p (YGR251w) and Efg1p (YGR272c-a), in ribosome biogenesis. I have shown that these factors are physically associated with early pre-ribosomal particles. Their absence lead to the accumulation of an aberrant precursor, 23S pre-rRNA, resulting from a direct cleavage of the nascent transcript in A3. It induces a production defect of the small ribosomal subunit ending to cell death. Nop19p, an essential protein, is required for early A0, A1 and A2 cleavages of the pre-rRNA. Our results show that it is needed for assembly of Utp25p in SSU Processome and for disassociation of RNA helicase Dhr2p after A0, A1and A2 cleavages. Observation of ribosomal particles sedimentation profiles in absence of Efg1p show the emergence of a 50S particle, previously described as a putative intermediate of small subunit. Appearance of this specific particle, in absence of Efg1p, is consistent with 23S pre-rRNA accumulation, whose fate is still in dispute. This 50S particle could be either a specific intermediate of small ribosomal subunit or an improperly assembled SSU Processome to be degraded