Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen Interaktionspartnern der Ubiquitin-Protein-Ligase E6-AP

Die menschliche Ubiquitin-Protein-Ligase E6-AP gehört zur Familie der HECT-Ligasen und ubiquitiniert im Komplex mit dem E6-Onkoprotein Krebs-assoziierter humaner Papillomviren (HPV) den Tumorsuppressor p53 und markiert ihn damit für den proteasomalen Abbau. In normalen (HPV-negativen) Zellen ist aber über Substrate und Interaktionspartner von E6-AP nur wenig bekannt. Mutationen im E6-AP-kodierenden Gen UBE3A führen zu einer schweren neurologischen Erbkrankheit, dem Angelman-Syndrom. In dieser Arbeit wurden Interaktionspartner von E6-AP im Yeast Two Hybrid -System identifiziert und nachfolgend charakterisiert. Dabei konnten Hinweise auf das HECT-Domänen Protein HERC2 als physiologisch relevantes Substrat von E6-AP erhalten werden. Weiterhin konnte gezeigt werden, dass das E6-AP-interagierende Protein HHR23A einen Einfluss auf das Ubiquitin- Proteasom-System hat und in vitro über seine Ubiquitin-assoziierte (Uba) Domäne an polyubiquitinierte Proteine bindet und sie vor Deubiquitinierung schützt. Für die Ubiquitinähnlichen (Ubl= ubiquitin like) Domänen von HHR23A und CHAP1 konnten spezifische Wechselwirkungen mit Ubiquitin-interagierenden Motiven (UIMs) verschiedener Proteine demonstriert werden. Somit sind UIMs neben Ubiquitin- auch spezifische Ubl-Domänen- Interaktionsmotive. Schließlich konnte nachgewiesen werden, dass UIMs, zumindest in vitro, Ubiquitinierungssignale darstellen, die transferabel sind und von verschiedenen Ubiquitin- Protein-Ligasen erkannt werden