Sebzáródásban szerepet játszó gének azonosítása Drosophila melanogaster embrióban = Identification of genes involved in epithelial closure processes in Drosophila melanogaster

Beállitottunk és sikeresen alkalmaztunk egy nagyléptékű, RNS-interferencián alapuló, in vivo video mikroszkópiával kapcsolt funkcionális genomikai szűrést a Drosophila hámzáródási folyamataiban részt vevő gének azonosítására. Előzetes szűrésként génkifejeződési adatbázisokat vizsgáltunk meg és 6800 olyan gént táláltunk, melynek transzkripuma jelen van a fejlődő embrióban. Ezen géneknek megközelitőleg 40%-át, több mint 2500 gént, csendesitettük kettősszálú RNS-ek (dsRNS) mikroinjektálásával. Csaknem 100000 embriót kezeltünk dsRNS-sel, amiről 80000 filmet készitetünk és elemeztünk. Számos olyan új gént azonositottunk, amelyek szükségesek az embrionális háti záródáshoz. Az élő, dsRNS-sel kezelt embriókról készült filmek elemzése lehetővé tette a gécsendesitéssel előidézett fenotípus részletes leirását. Azonositottunk olyan géneket, melyek hiánya összehangolatlan záródást vagy a záródás teljes hiányát okozza. Jelenleg folytatjuk a funkcionális genomikai szűrést, illetve elkezdtük a szűréssel azonosított géneknek a torzáródásban betöltött szerepét vizsgálni. A sebzáródási esszé körülményeit vad tipusú embriókon beállitottuk és előkészitettük a dsRNS-sel kezelt embriók sebzáródási esszéit. | We have established and successfully applied an RNAi based genetic screen coupled with automated in vivo video microscopy to identify novel genes involved in epithelial closure processes. As a primary selection, we searched gene expression databases for genes whose transcripts are present in the embryo. This way, 6800 genes were found and selected for further analysis. DsRNAs for 2500 genes has been microinjected into ca. 100000 embryos, 80000 movies has been generated and analysed. Several novel genes has been shown to be involved in embryonic dorsal closure. Live imaging of the dsRNA-treated embryos enabled the identification and detailed phenotypic description of novel regulator genes of epithelial closure. Silencing of these genes caused abnormal dynamics of the closure process, misaligned epithelial sheets or complete lack of dorsal closure. Further analysis of the thorax closure of the adult flies will be an easy and quick method to confirm the function of our candidate genes in epithelial closure processes. Then, selected genes of which involvement in both the embryonic dorsal closure and thorax closure has been demonstrated will be subjected to wound healing assays. Parameters for the wound healing assays has been optimised and wound healing assays has been performed on wild type embryos