Az akut izületi vérömleny patomechanizmusának vizsgálata = Investigation on the pathomechanism of acute hemarthrosis

A projekt végrehajtása során , in vitro és klinikai vizsgálatokat végeztünk annak érdekében, hogy újabb részleteit tárjuk fel az akutan kialakuló izületi vérömleny patomechanizmusának. In vitro kísérleteink alkalmával az ozmotikus stressz által okozott intracelluláris jelátviteli folyamatok változásait követtük nyomon a porcsejtekben. Megállapítottuk, hogy az akut haemarthros kialakulása során is létre jövő, több mint kétszeres ozmotikus nyomásemelkedés hatására, in vitro körülmények között, jelentős p38MAPK, ERK1/2, CREB, JNK1/2 és Akt1 aktiválódás következik be. Ez együtt jár a porcsejtek fokozott pusztulásával, amelynek hátterében döntően apoptótikus folymatok állnak, amint azt az annexin-v és caspase-3 flow citometriás vizsgálatai bizonyították. Későbbi kísérleteink, amelyeket a pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP) chondroprotektív hatásának igazolására végeztünk el igazolták, hogy a PACAP a fenti jelátviteli utak kedvező irányú befolyásolásával, jelnetős porcvédő hatással rendelkezik. Klinikai vizsgálataink során, térdizületi haemarthrossal jelentkező betegek izületi punktátumát hasonlítottuk össze a vénás vérrel, hogy újabb információkat szerezzünk az intraartikuláris oxidatív stressz és leukocyta aktiváció mértékéről. Eredményeink igazolták az izületi üregben kialakuló oxidaítv stressz tényét, az itt lévő leukocyták szignáltranszdukciós folyamatainak megváltozását és a jelentős mértékű gyulladásos citokin termelődését, röviddel a sérülés után. | Invitro and clinical investigations were performed in order to explore some new detalis of the pathomechanism of acute intraarticular bleeding. Osmotic stress induced changes of intracellular signal transduction pathways were studied on primary chondrocyte cultures. Significant alterations of p38MAPK, ERK1/2, CREB, JNK1/2 and Akt1 activaton was indicated, which was attached to an increased and mainly apoptotic death of chondrocytes, as it was proved by flow cytometric analysis of annexin-v and caspase-3. Investigations with pituitary adenylate cyclase activating polypeptide provided good evidence for its chondroprotective effect, showing that PACAP is able to affect favourably the mentioned intracellular signal transduction pathways. In order to gain infromation regarding intraarticular oxidative stress and leukocyte activation, paired samples of joint effusion and periferal venous blood from patients with acute hemarthrosis were compared during the clinical investigations. The fact of intraarticular oxidative stress was confirmed, moreover the changes of leukocyte signal transduction and an extreme production of several inflammatory citokines (IL-1,IL-6, IL-8,IL-10,IL-12 és TNF-alfa) fllowing the injury were indicated as well