Zpøsoby purifikace rekombinantního proteinu p53 z E.coli

Protein p53 je nÆdorový supresor. Za normÆlních okolností se vyskytuje v buòce jen v malØm mnoství, ale za stresových podmínek (pokození DNA vyvolanØ napł. UV zÆłením) se jeho hladina výraznì zvýí. Pøsobí jako transkripŁní faktor, který díky svØ sekvenŁnì specifickØ vazbì aktivuje expresi mnoha genø døleitých pro zastavení bu-nìŁnØho cyklu (tím umoòuje buòce opravit pokození) nebo v płípadì rozsÆhlØho po-kození vyvolÆvÆ programovatelnou smrt buòky- apoptosu (Oren and Rotter 1999). V naí laboratołi se zabývÆme studiem vazby tohoto proteinu na superhelikÆlní DNA (PaleŁek et al. 1997). K naemu studiu preferenŁní vazby na tuto formu DNA vyuívÆ-me lidský protein p53 izolovaný jednak z eukaryotickØho systØmu hmyzích bunìk a płedevím z prokaryotickØho bakteriÆlního systØmu E.coli. Monosti izolace rekombinantního proteinu p53 z E.coli a. Výbìr bakteriÆlních vektorø Pro získÆní velkØho mnoství rekombinantního proteinu møeme vyuít ładu ex-presních vektorø se silnými promotory (Studier et al. 1990) pro E. coli. Specifikaci proteinø odvozených z proteinu p53 ukazuje tab.1. Jsou zde uvedeny typy vektorø